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HIV 감염을 위한 조작된 CD8 T 세포 요법

HIV 감염을 위한 조작된 CD8 T 세포 요법


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CD8 T 세포는 감염 초기 단계에서 HIV를 제어하는 ​​데 효과적입니다. 그러나 시간이 지나면 바이러스가 돌연변이를 일으켜 CD8 T 세포에 대한 회피 메커니즘을 발전시킵니다. 암세포도 면역 회피 메커니즘을 개발하고 과학자들은 이러한 메커니즘을 차단하기 위해 여러 기술을 사용하고 있기 때문에 "바이러스 탈출"을 제어하는 ​​것도 가능하다고 생각합니다. 나는 HIV 면역 요법에 대해 몇 가지 연구를했지만 내가 찾은 유일한 것은 항체 기반 면역 요법이었습니다. 제 질문은 HIV에 감염된 세포를 표적으로 삼을 맞춤형 CD8 T 세포를 기술적으로 활성화하는 것이 가능합니까?


댓글에 있는 사람들은 이것이 "환자를 AIDS에 더 빨리 몰아넣을 것"이거나 잠복하는 바이러스 때문에 효과가 없을 것이라고 제안합니다. 둘 다 옳지 않습니다.

질문은 HIV에 특이적인 조작된 T 세포 수용체로 CD8을 조작하는 것에 대한 것입니다. 이것은 논리적인 접근 방식이며 여러 그룹에서 시도했습니다.

  • 조작된 조혈 줄기 세포에서 파생된 항원 특이적 T 세포에 의한 HIV의 생체 내 억제

  • HIV 특이적 알파벳 TCR 유전자의 전달에 의한 1차 인간 CD8 T 림프구의 항HIV 효과기 기능의 재구성

  • MTB 및 HIV-1 펩타이드에 특이적인 두 개의 별개의 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포의 개발

  • HIV-1 gp120에 대한 항체 유형 특이성을 갖는 키메라 T 세포 수용체에 의한 T 세포 조작

Pubmed에서 간단히 검색하면 다른 많은 기사가 나타납니다. 이러한 접근 방식 중 일부는 임상 시험에 들어갔습니다. 예를 들어:

이 접근 방식의 문제는 "환자를 AIDS에 더 빨리 몰아넣는다"는 것이 아닙니다. 강력한 CD8 T 세포 반응은 HIV를 잘 조절하며, CD4 T 세포 손실의 한 원인일 수 있지만 특히 HIV 감염의 초기 단계에서 이것이 주요 원인이라고 더 이상 믿어지지 않습니다.

HIV의 CD8 제어의 일반적인 문제는 바이러스가 CD8에 의한 제어를 피하기 위해 돌연변이를 일으킬 수 있다는 것입니다. 본질적으로 HIV의 모든 경우는 감염 초기 단계에서 CD8 T 세포 반응에 의해 효과적으로 제어되지만 바이러스는 돌연변이되어 제어를 벗어나고 CD8 반응은 다시 한 번 바이러스에 적응하고 제어하며 바이러스는 돌연변이 및 탈출… 이것은 CD8 변화와 상관관계가 있는 혈액 내 바이러스의 반복적인 반동을 보여주는 많은 환자에서 추적될 수 있고 추적되었습니다.

HIV에 대한 더 나은 CD8 제어는 광범위한 CD8 반응과 관련이 있습니다. 즉, 많은 바이러스 단백질을 공격하여 바이러스 탈출에 여러 동시 돌연변이가 필요합니다(바이러스에 대해 기하급수적으로 더 어렵습니다). (또는 CD8 반응은 매우 제한된 소수의 단백질을 공격할 수 있으므로 바이러스가 성공적으로 돌연변이를 일으킬 수 없습니다. 그러나 MHC 제한과 관련된 이유로 소수의 사람들에게만 효과가 있는 것으로 보입니다. )

조작된 CD8 T 세포 반응은 불가피하게 하나 또는 소수의 바이러스 단백질에 대한 것입니다. 이는 개념적으로 HIV 감염 후의 자연적인 상황과 유사합니다. 즉, 바이러스 돌연변이와 면역 탈출과 같은 결과가 동일할 수 있습니다.

TcR을 엔지니어링한다는 것은 목표를 합리적으로 선택할 수 있다는 것을 의미하기 때문에 자연스러운 상황보다 더 잘할 수 있지만 명확하지 않습니다. 전반적으로, 그룹이 아직 획기적인 치료법 없이 수십 년 동안 이 접근 방식을 연구해 왔다는 사실은 이것이 유용할 수 있지만 슬램덩크가 되지는 않을 것임을 시사합니다.


CD8의 구조

CD8은 둘 중 하나의 이황화 결합 이량체로 존재합니다. α 그리고 β 체인 또는 두 개 α 쇠사슬. 인간 CD8의 N-말단 113개 아미노산의 결정 구조는 9개의 면역글로불린(Ig) 가변 도메인과 상동성을 나타냈다. β 두 갈래로 갈라진 가닥 β 시트, 네 가닥 중 하나와 다섯 가닥 중 다른 하나. B 가닥에서 F 가닥으로의 Ig 유사 시트간 이황화물 다리가 CD8에 존재합니다.α. B 가닥과 C 가닥의 시스테인 사이에 또 ​​다른 이황화 결합이 형성될 수 있습니다. 아미노 말단 Ig 유사 도메인을 막관통 분절에 연결하는 힌지 영역은 50개의 잔기로 구성된다. α 사슬과 30개의 잔기 β 둘 다 글리코실화 및 시알화될 가능성이 있는 사슬. 시알화 수준 β 사슬 힌지 영역은 T 세포의 활성화 상태에 따라 달라지며 CD8에 대한 기능적 의미를 가질 수 있습니다( 그림 1 ).

그림 1 . 2개의 α 사슬로 구성된 CD8 동종이량체의 N-말단 영역의 3차원 분자 모델(A) 리본 표시, (B) 스틱 표시. N-말단 113개 아미노산에 대한 구조 데이터는 결정학(단백질 데이터베이스: 1CD8)을 기반으로 합니다. 각 단량체에 대한 3차원 모델은 RasMol 버전 ​​2.5(Roger Sayle, Greenford, Middlesex, UK)로 생성되었으며 두 개의 단량체는 설명된 대로 결합되었습니다(Leahy .(1992) 세포 68:1145). 색상 코딩은 그룹 파란색이 CDR1 유사 루프에 해당하고, 밝은 파란색은 CDR2 유사 루프에 해당하고, 석회는 CDR3 유사 루프에 해당함을 나타냅니다. 단량체는 색상의 밝기가 구별됩니다. (색상 플레이트 11 참조.)


CD4+ 및 CD8+ T 세포의 기능 장애 표현형은 초기 또는 만성 HIV-1 감염 동안 ART를 시작한 환자에서 비슷합니다

항레트로바이러스 요법(ART)의 조기 시작은 모든 HIV-1 감염 환자에게 치료를 권장하는 현재 지침에 따라 일반적인 임상 관행이 되고 있습니다. 그러나 감염 초기 단계에서 시작된 ART가 이전에 만성 HIV-1 감염 동안 CD4+ 및 CD8+T 세포에서 보고된 비정상적인 표현형 특징의 확립을 방지하는지 여부는 알려져 있지 않습니다. 이 횡단면 연구에서 혈액 표본은 감염 직후 ART 치료를 시작한 17명의 HIV-1 감염 환자(초기 ART[EA]), 17명의 연령 일치 HIV-1 감염 환자로부터 만성 단계에서 ART를 시작했습니다. 감염(후기 ART[LA]) 및 25명의 연령 일치 비 HIV-1 감염 대조군. 표본 수집 시 EA 및 LA 그룹의 환자는 비슷한 기간 동안 ART를 받았습니다. 전체 HIV-1 DNA는 정량적 PCR에 의해 백혈구에서 측정되었습니다. sCD14 및 β-2 마이크로글로불린을 포함한 9개의 염증 매개변수 및 1개의 섬유증 마커의 농도가 혈장에서 측정되었습니다. 또한, 비정상적인 면역 활성화(인간 백혈구 항원 - 항원 D 관련 [HLA-DR] 및 CD38), 피로(계획된 사멸 1, CD28, CD57) 및 말단 분화(CD127)의 마커의 발현을 CD4+ 및 CD8+T에서 측정했습니다. 세포. T-세포 증식은 Ki67 발현을 통해 측정하였다. 혈액 내 총 HIV-1 DNA 사본은 LA 그룹에 비해 EA에서 유의하게 낮았습니다(P = 0.009). 순진한 CD4+ T 세포에서 HLA-DR의 발현만이 LA와 EA를 구별하는 반면, 3개의 표면 마커의 발현은 대조군과 HIV-1에 감염된 환자의 T 세포 집단을 구별했습니다. 여기에는 대조군과 비교하여 EA로부터 CD4+ T 세포를 구별하는 HLA-DR과 대조군과 환자의 두 그룹을 구별하는 각각 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 CD38 및 CD127이 포함되었습니다. sCD14 수준은 EA 환자에서 유의하게 더 높았고, β-2 마이크로글로불린 수준은 대조군에 비해 LA 그룹에서 더 높았다. 우리의 결과는 EA 및 LA 환자 모두의 T 세포에서 활성화(CD4+ T 세포의 HLA-DR 및 CD38) 및 말단 분화(CD8+ T 세포의 CD127) 마커의 동등한 비정상적인 발현을 보여줍니다. EA의 혈액에서 총 HIV-1 DNA 사본의 크기는 LA 환자에 비해 낮았습니다. 이러한 발견은 일차 HIV-1 감염 동안 T 세포 구획에서 발생하는 일부 이상이 초기 ART로 교정되지 않을 수 있음을 시사합니다.

이해 상충 진술

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

피규어

CD4+ T 세포 수 및 CD4+/CD8+…

치료 기간 동안 치료받은 개인의 혈액 내 CD4+ T 세포 수 및 CD4+/CD8+ 비율…

PBMC에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포 및 해당 하위 집합의 빈도. NS…

CD38++ CD4+, HLA-DR+의 주파수…

CD38++ CD4+, HLA-DR+ CD4+ 및 CD127- CD8+ T 세포 하위 집합의 빈도. 주파수…

Ki67의 주파수 표현…

CD4+ 및 CD8+ T 세포를 발현하는 Ki67의 빈도. 빈도…

총 HIV-1 DNA 사본의 크기와 T 세포 하위 집단과의 상관 관계 및…


자가 조혈모세포이식의 치료 효능 및 현재 한계에 대한 증거

CD4 + 또는 HSC의 유전자 변형 후 감염 내성을 개발하기 위한 여러 임상 시험이 지금까지 전 세계적으로 수행되었거나 현재 진행 중입니다. 7 HIV-1에 감염된 환자를 대상으로 한 최근 유전자 변형 CD4 + T 세포 및 CD34 + HSC 임상 시험의 요약은 다음과 같습니다. 1 번 테이블 . 의미심장하게도, 유전적으로 변형된 세포를 주입한 후 경미한 합병증만이 보고되었으며, 이는 이 치료적 접근이 투여와 관련하여 복잡하지만 환자 안전 측면에서 해롭지 않다는 것을 시사합니다. 8,9,10,11 Simonelli의 연구 et al. 10은 바이러스 복제가 증가하지 않고 HIV 저장소가 이식 전 수준 이상으로 상승하지 않는다는 것을 보여주었습니다. 또한 HIV-1 감염 환자의 자가 조혈모세포이식 후 면역 회복은 HIV 음성 림프종 환자와 동일한 것으로 보고되었습니다. 10

1 번 테이블

미츠야스 et al. 12개는 OZ1(리보자임에 대한 가상현실 그리고 싸구려 HIV-1의 중복 판독 프레임), 말초 혈액에서 0.38%의 마킹 수준이 치료적으로 유익한 결과를 초래했습니다. 실험군과 대조군을 비교할 때 바이러스 부하가 감소하여 혈장 바이러스혈증 반동 속도가 낮아져 HAART 치료를 다시 시작하기 전에 기간이 연장되었습니다. 가장 중요한 것은 CD4 + T 세포가 실험 코호트에서 증가하여 유전적으로 변형된 HSC 이식의 치료적 가치를 입증했다는 것입니다. 12,13 유전자 변형 HSC 주입 후 임상적 이점과 비변형 HSC 주입 후 이식 환경에서 일반적으로 나타나는 임상적 이점 사이의 정확한 상관 관계를 지정하는 것은 어렵습니다. HSC의 생착에 따른 골수형성 및 재구성은 프로바이러스 DNA를 보유하는 말초 CD4 + T 세포의 초기 감소를 초래하지만, 말초 혈액의 프로바이러스 DNA 함량은 지속적인 ART에도 불구하고 점진적으로 증가하는 것으로 나타났습니다. 14,15

앞서 언급한 임상 시험에서 관찰된 바와 같이, 유전자 변형 세포가 HIV-1 환자에게 주입된 현재까지 공개된 모든 임상 시험 외에도, 유전자 변형 세포의 극히 낮은 비율이 유전자 변형 HSC 또는 CD4 + T 세포. 임상 연구는 아직 효능 단계로 진행되지 않았으며, 임상적으로 유익한 결과를 효과적으로 이끌어내는 데 필요한 유전자 변형 HSC의 임계값을 결정하는 것은 현재 달성 가능한 수준을 기반으로 하는 상당한 장애물이 될 것입니다. 12,13,14,15,16의 가능성 생체 내 감마레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터에 선택 카세트를 포함하여 선택하는 것은 화학요법제로 치료한 후 비인간 영장류(NHP) 모델에서 매우 효과적인 것으로 나타났습니다. 17,18 이 가능성은 현재 림프종이 있는 HIV-1–감염 환자에 대한 진행 중인 임상 시험에서 조사 중입니다( <"type":"clinical-trial","attrs":<"text":"NCT01769911","term_id ":"NCT01769911">> NCT01769911), 비림프종 HIV-1 환자를 위한 화학요법제 활용 가능성은 그다지 매력적이지 않습니다.

한계에도 불구하고 유전자 변형 CD4+ T 세포의 양성 선택은 유전자 변형 CD34+ 세포 주입 및 유전 변형 CD4+ T 세포의 직접 주입 후 임상 시험에서 관찰되었습니다. 11,18 소아 임상 시험에서 Podsakoff는 et al. 11은 우성 음성 Rev 단백질인 hum10 유전자로 유전적으로 변형된 CD34 + HSC의 주입 후, 유전자 변형된 CD4 + T 세포가 치료 중단 후 검출 불가능에서 1/10,000으로 증가했다고 보고했습니다. 그러나 유전자 마킹의 증가는 장기간 지속되지 않았으며 이 연구는 감염 내성 CD4 + T 세포의 선택적 이점을 입증했습니다 생체 내. 11 CD4+T 세포의 직접적인 유전자 변형 및 주입은 항 HIV 유전자를 발현하는 CD4+ T 세포에 선택적인 이점을 부여하는 유사한 결과를 제공했습니다. 대조군 유전자를 발현하는 CD4 + T 세포와 비교할 때, CD4 + T 세포를 함유하는 항-HIV 유전자는 장기 및 단기 양성 선택 모두에서 증가를 나타내었다. Podsakoff 그룹이 보고한 결과와 유사하게, 바이러스의 더 높은 복제 기간 동안 세포를 포함하는 항 HIV 유전자의 피크가 있었습니다. 18 이에 반해 반 룬젠은 et al. 도 8은 mC46 융합 억제 펩티드를 발현하는 유전적으로 변형된 CD4 + T 세포에 대한 선택적 이점의 관찰을 보고하지 않았다. 이 결과에 대해 인용된 이유에는 가능한 면역 반응, mC46 발현의 하향 조절 및 다음으로 인한 합병증이 포함됩니다. 생체 외 이는 유전자 변형된 세포 집단의 증식에 생존에 불리한 영향을 미칠 수 있는 확장입니다. 8

유전자 변형 세포의 전체 비율을 증가시키기 위한 지속적인 노력이 필요합니다. 생체 내. HSC의 초기 주입 후 관찰된 낮은 수준에도 불구하고 유전자 변형 세포는 자가 HSC 이식 후 몇 년 동안 검출 가능한 상태로 유지되는 것으로 나타났습니다. 8,11,12,13 HIV 자체가 선택적 제제로 사용될 수 있음 생체 내 그러나 HAART 중단 후 NHP 연구에서 비변형 CD4 + T 세포는 감염의 급성기에 따른 분명한 선택적 이점에도 불구하고 지속된다는 점에 주목하는 것이 중요합니다. 17 비변형된 세포의 회복은 HAART 중단 후 감소된 바이러스 저장소를 유지하는 데 중요한 문제를 제기합니다.

다음 섹션에서 우리는 자가 이식이 HIV-1 감염 환자에 대한 대체 요법으로 성공하기 위해서는 엘리트 또는 자연 조절자에 필적하는 표현형이 감염 내성 유전자 변형 유전자의 주입 및 생착 후에 달성될 수 있어야 한다고 제안합니다. HSC. 앞서 지적한 바와 같이 자가 이식 자체는 바이러스 저장소의 제거를 초래하지 않고 오히려 프로바이러스 함유 세포의 수를 상당히 감소시킨다. 15 ART가 없을 때 바이러스 복제를 제어하는 ​​이식된 감염 내성 면역 세포 집단의 능력은 대체로 HIV-1 감염 환자에 대한 치유 요법으로서 자가 이식의 효능을 결정할 것입니다.


자가면역질환에 대한 CAR T 세포

자가면역 질환에 대한 많은 최신 치료법은 완치되지 않고 현저한 부작용이 있으며 모든 질병 관련 합병증을 치료하지 않습니다. 따라서 CAR T 세포 기반 치료법과 같은 파괴적 치료법이 절실히 필요합니다. 예를 들어, 이펙터 CAR T 세포는 자가면역 질환의 병리학적 면역 세포를 죽이도록 지시될 수 있습니다. 대안적으로, 많은 자가면역 질환이 차선의 기능, 인신매매, 안정성 및 T의 풍부함의 조합에 기인할 수 있습니다.등록 세포, CAR은 T를 안내하는 데 사용될 수 있습니다.등록 세포가 활성화되고 증식하며 억제 기능을 발휘할 수 있는 자가면역 환경으로 이동합니다. 아래에서 두 가지 접근 방식에 대해 설명합니다.

키메라 자가항체 수용체

키메라 자가항체 수용체(CAAR)에서 수용체의 세포외 부분은 자가 반응성 항체의 단백질 표적으로 구성되며, 이를 통해 CAAR T 세포는 CD19CAR T 세포가 표적 및 파괴하는 방식과 유사한 방식으로 자가면역 B 세포를 파괴할 수 있습니다. B 세포 백혈병 세포. 따라서 다클론성 풀의 자가면역 B 세포의 B 세포 수용체(BCR)가 이펙터 CAAR T 세포를 만나면 파괴되어 자가항체를 생성할 수 없습니다. 자가면역 B 세포가 데스모글레인을 표적으로 하여 피부 및 기타 점막에 물집을 유발하는 인간화된 심상성 천포창의 인간화 마우스 모델에서 개념의 전임상 증거를 얻었습니다. 이 질병을 가진 환자는 전통적으로 전신 면역 감시를 감소시키는 코르티코스테로이드 및 기타 광범위한 면역억제제로 치료되었습니다. 2세대 4-1BB-CD3ζ 신호전달 도메인에 융합된 데스모글레인 3으로 구성된 CAAR을 발현하는 이펙터 T 세포는 동족 BCR과 상호작용하고 병원성 B 세포의 용해를 유도했습니다 86 . 이펙터 CAAR T 세포는 동족 세포 표적을 죽임으로써 기능하기 때문에 암 치료를 위한 이펙터 CAR T 세포에 대한 진행 중인 임상 및 실험실 연구에서 배운 교훈은 이펙터 CAAR T 세포 치료에도 적용될 가능성이 높습니다. 이펙터 CAAR T 세포의 사용은 전신 홍반성 루푸스 또는 류마티스 관절염과 같은 다른 B 세포 매개 병리를 치료하기 위해 확장될 수 있습니다. 또한, CAR 분자를 표적으로 하는 CAAR T 세포는 이펙터 CAR T 세포 87의 이전 주입으로 인한 자가면역을 제거하기 위한 안전 스위치로 사용될 수 있습니다.

조절 T 세포 재지정

최근에는 다클론 T 사용의 안전성과 타당성을 테스트하는 여러 임상 1상 시험이 완료되었습니다.등록 골수 이식 후 1형 당뇨병의 진행을 지연시키고 이식편대숙주병(GVHD)을 예방하는 세포 88,89,90,91 . 이러한 선구적인 연구는 매우 많은 수의 T를 생성하는 것으로 나타났습니다.등록 GMP 준수 방식의 세포는 92,93 가능하며 큰 T등록 세포 주입은 전반적인 면역 억제의 증거가 없는 환자에게 잘 견딥니다. 중요하게는, 확장 T로 치료받은 환자에서 관찰된 급성 GVHD의 발생률이등록 세포가 감소했습니다. 또한 제1형 당뇨병 환자를 대상으로 한 연구에서 T등록 세포는 주입 후 1년까지 발견되었으며, 이는 주입된 T등록 세포는 지속될 수 있으며 따라서 장기 내성을 촉진할 수 있습니다.

T에 CAR 도입등록 세포는 항원 특이적 T를 생성하는 매력적인 방법입니다.등록 세포. T의 수를 줄이는 것 외에도등록 효과적인 반응에 필요한 세포 94, 항원 특이성은 주입된 T의 트래피킹 및 표적외 억제를 제한해야 합니다.등록 세포. 그러나 T의 생물학에는 중요한 차이점이 있습니다.등록 TCR 자극 95, 공동 수용체 결찰 96 및 사이토카인 97에 대한 반응을 포함하여 암 환자에서 이펙터 CAR T 세포를 사용하여 확립된 공리가 CAR T에 얼마나 적용 가능한지 의문을 제기하는 세포 및 이펙터 T 세포등록 세포.

HIV 감염 및 암에 대한 CAR 기반 요법과 비교하여 CAR T의 사용등록 자가면역과 싸우는 세포는 비교적 새로운 개념입니다. 획기적인 연구에서 CAR T등록 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid(TNBS)에 특이적인 세포를 TNBS 유도 대장염 98의 마우스 모델에 사용했습니다. 저자는 CAR T가등록 세포는 항원 특이적 방식으로 증식하고 표적 기관에 축적될 수 있으며, 다클론성 T등록 세포는 효과가 없었고 표적 항원의 존재하에서 다른 형태의 대장염의 방관자 억제를 촉진했습니다. CAR T의 능력을 보여줌으로써 이러한 발견을 기반으로 한 이후 연구등록 대장염 99, 대장염 관련 암 100 및 실험적 자가면역 뇌척수염 101의 다른 마우스 모델에서 질병을 예방 및/또는 개선하기 위한 세포. 이 마우스 연구는 CAR T를 움직이는 강력한 근거를 제공합니다등록 세포 치료를 전임상 연구로. 상자 1에서 MHC 불일치 이식이 첫 번째 CAR T 테스트에 대한 매력적인 표시인 이유에 대해 논의합니다.등록 클리닉의 세포.

Box 1 CAR-발현 조절 T 세포 요법의 첫 번째 임상 시험을 향해

키메라 항원 수용체(CAR)-발현 조절 T(T등록) HLA 분자를 인식하는 세포(동종특이성 T등록 세포)는 자가면역에 대한 CAR T 세포 치료제를 테스트하는 이상적인 시나리오를 제공할 수 있습니다(이상화된 워크플로는 그림 참조). HLA-이종 이식의 맥락에서 인간 HLA 분자는 항원이 풍부하고 이식된 기관에서만 발현되기 때문에 CAR의 이상적인 표적입니다. 또한, CAR T에 의한 HLA 분자의 결찰등록 세포는 이식 세포 기능에 부정적인 영향을 미치지 않을 것입니다. 이러한 분자는 신호 전위 134가 없기 때문입니다. HLA-A2-특이 CAR T등록 세포는 면역 결핍 마우스 59,60,61에서 이식편 대 숙주 질환 및 피부 이식 거부로부터 보호하는 데 사용되었습니다. 자동차 T등록 시험관 내에서 형질도입되고 확장된 세포 집단은 포크헤드 박스 단백질 P3(FOXP3) 발현 및 T의 탈메틸화 수준이 정상 수준이었습니다.등록 세포 특이적 탈메틸화 영역을 형성하고 적절한 치료 수의 세포로 확장하는 능력을 유지했습니다. 중요하게, CAR의 활성화는 표적 세포 121의 최소 세포 독성을 유발했습니다. 또한, 유인원과 인간 MHC 분자 사이의 높은 수준의 보존은 영장류 간 장기 이식에서 인간 HLA 특이적 CAR 구조를 직접 평가할 가능성을 높입니다. 간 이식은 동종특이성 T를 검사할 수 있는 매력적인 영역입니다.등록 세포. 이식편의 1년 생존율은 높지만 장기 면역억제는 말초 면역감시를 감소시키고 이식편 수혜자에게 신독성을 유발할 수 있습니다. 최근 임상 연구에 따르면 일부 이식 수혜자는 안전하게 약물을 끊을 수 있어 CAR T가등록 세포 요법은 면역 억제가 제거된 후 내성을 촉진하는 능력에 대해 테스트될 수 있습니다 136,137,138. 이유 과정에서 급성 거부 반응을 경험한 환자의 경우 거부 반응을 중단시키기 위해 면역억제제를 다시 시작할 수 있습니다. 또한 간 기능 검사를 통해 이식 거부를 비침습적으로 모니터링할 수 있으며 필요한 경우 생검을 일상적으로 시행합니다.

대상 선택

암 환자에서 CAR T 세포를 사용하는 것과 유사하게 CAR T의 이상적인 항원 표적등록 자가면역 질환의 세포는 세포 표면에서 고도로 발현되며, 발현은 관심 있는 세포 유형 또는 조직으로 제한됩니다(이펙터 CAR T 세포와 CAR T의 특성 간의 비교는 표 2 참조).등록 세포). 불행히도 암 특이적 이펙터 CAR T 세포에 대한 이상적인 표적을 식별하는 어려움은 CAR T에도 공유됩니다.등록 세포. 그러나 표적 외 인식의 결과는 매우 다릅니다. 표적, 종양 외 조직에 대한 이펙터 CAR T 세포의 반응성은 심각한 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, 인간 표피 성장 인자 수용체 2(ERBB2로도 알려진 HER2) 특이적 이펙터 CAR T 세포는 폐 102에서 표적 항원의 낮은 발현 수준으로 인해 한 환자에서 치명적인 급성 호흡 곤란 증후군을 유발했습니다. 대조적으로, CAR T의 조직외 반응성은등록 다클론 T의 주입이 알려져 있기 때문에 세포는 아마도 덜 심각한 결과를 가질 것입니다.등록 세포는 기회 감염이나 암을 일으키지 않습니다 88,89,90,91. 그러나 일부 CAR 구축물 54에 대해 관찰된 강장제 신호는 CAR T를 제공할 수 있습니다.등록 따라서 세포 구성 억제 활성, 비변형 T의 안전성 프로파일등록 세포는 CAR T의 안전성 프로파일을 예측하지 못할 수 있습니다등록 세포. CAR T에 의한 표적, 조직외 인식에 대한 한 가지 우려등록 세포는 이러한 세포가 필요로 하는 곳을 희생하면서 우선적으로 조직외 부위로 이동할 수 있으므로 이러한 조직외 싱크가 항원 특이적 T의 효과를 제한할 수 있다는 것입니다.등록 세포 요법. 또한, T의 축적등록 그렇지 않으면 건강한 조직의 세포가 종양 형성이나 병원체 생존에 유리한 환경을 만들 수 있지만 우리가 아는 한, 이것은 아직 실험적으로 해결되지 않았습니다.

세포 안정성

이펙터 CAR T 세포가 고갈된 T 세포 또는 T 세포로 전환되는 경우등록 이는 안전 문제를 일으킬 가능성이 낮습니다. 이 전환은 요법의 효능을 감소시킬 수 있으며, 이론적으로 대부분의 이펙터 CAR T 세포가 T로 전환되는 경우등록 이것은 질병의 진행을 촉진할 수 있지만 이것은 지금까지 암 실험에서 관찰되지 않았습니다. 대조적으로, CAR T가등록 세포는 이펙터 T 세포로 전환되는데, 이는 질병 진행을 악화시킬 가능성이 있기 때문입니다.

마우스 연구의 증거에 따르면 T등록 세포가 염증 상태에 노출되면 일부 세포는 포크헤드 상자 단백질 P3(FOXP3)의 발현을 잃고 전염증 기능을 얻습니다 103. 따라서 β 세포 특이적 CAR T의 전환등록 세포를 이펙터 T 세포로 전환하는 것은 췌도 β 세포의 사멸을 강화하고 제1형 당뇨병의 진행을 지연시키기보다는 가속화할 것입니다. CAR을 포함하는 이펙터 T 세포가 발생할 수 있는 또 다른 방법은 T 세포의 분리를 오염시키는 경우입니다.등록 소스 재료에 사용되는 셀. 앞서 언급한 바와 같이 T등록 세포는 드문 집단이며 100% 순도를 달성하는 것은 임상 규모에서 현재 GMP 시약을 사용하여 거의 불가능할 것입니다. 이펙터 CAR T 세포와 CAR T가 어떻게 작용하는지 완전히 이해하지 못하기 때문에등록 세포가 생체 내에서 차등적으로 증식하고 이동하므로, 이펙터 CAR T 세포의 작은 개체군이 CAR T보다 훨씬 빠르게 확장하거나 이동할 수 있습니다.등록 파괴적인 결과를 초래하는 세포. 그 반대는 T등록 세포는 이펙터 CAR T 세포 주입 제품을 오염시킬 수 있습니다. 그러나 T등록 세포는 형질도입 전에 항-CD25 비드에서 선택하여 주입 제품에서 쉽게 제거할 수 있으며 시험관 내에서 이펙터 T 세포를 증식시키는 데 사용되는 배양 조건은 T를 선호하지 않습니다.등록 세포 증식 105 .

안전

이펙터 T 세포가 T에 의해 발현되도록 의도된 CAR을 발현할 가능성을 최소화하기 위한 몇 가지 전략이 제안되었습니다.등록 세포. 첫째, 초기 출발 물질의 선택이 중요합니다. 엔지니어드 T등록 성인 말초혈액 단핵세포(PBMC)가 아닌 제대혈에서 유래한 세포는 후기에 발생하는 이펙터 T 세포가 없고 T에 비해 쉽게 분리되기 때문에 출발 물질로 가장 안전할 것입니다.등록 말초혈액의 세포와 T와 관련된 순진한 표현형을 가지고 있습니다.등록 세포 계통 안정성 및 기능 106,107,108 . 환자에게 냉동보존 자가 제대혈이 없는 대부분의 시나리오에서 제3자 제대혈 T등록 세포는 이미 GVHD 89,90,93,109의 치료를 위한 임상 시험에서 사용되고 있는 실행 가능하고 안전한 대안입니다. 그러나 GVHD 이외의 응용 프로그램의 경우 잠재적인 MHC 불일치가 주입된 T의 장기적인 지속성과 기능에 어떻게 영향을 미칠 수 있는지 불분명합니다.등록 세포. 제대혈 세포의 적절한 공급원이 없는 경우, 성인 PBMC는 나이브 T에 대해 분류될 수 있습니다.등록 세포 마커 106,110,111은 GMP 호환 분류기가 상용화되면 제공됩니다.

확장된 T의 안정성을 테스트하려면등록 세포 생성물, T의 메틸화등록 세포 특이적 탈메틸화 영역은 이펙터 T 세포 전환 전위(112)에 대한 마커로 기능할 수 있습니다. 이 테스트는 24시간 이내에 수행할 수 있으며 확장 T의 제품 출시 기준에 포함되었습니다.등록 환자 주입용 세포 113 . 마지막으로, 우리는 이펙터 T 세포에서 기능하기에는 너무 낮은 친화도를 갖는 TCR이 T 세포에서 발현될 때 강력한 항원 특이적 억제를 부여할 수 있음을 보여주었습니다.등록 T를 활성화하는 데 필요한 신호 강도를 나타내는 셀(114)등록 세포는 이펙터 T 세포를 활성화하는 데 필요한 것보다 적습니다. 따라서 CAR T의 안전성이등록 세포 요법이 개선될 수 있는 것은 CAR을 조작하여 T에서 기능하는 신호 강도를 갖도록 하는 것입니다.등록 세포이지만 효과기 T 세포는 아닙니다.

세포 요법이 환자에게 투여되면 조작된 세포의 세포자멸사를 유도하는 능력이 부작용을 완화할 수 있습니다. 여러 자살 스위치가 설명되어 있어 그렇지 않으면 불활성 약물의 투여가 주입된 CAR T 세포 제품 115의 제어된 세포자멸사를 유발합니다. FOXP3 발현이 CAR T에 의해 손실될 때 자율적으로 세포 사멸을 유도하는 스위치와 같은 더 복잡한 스위치가 미래에 구상될 수 있습니다.등록 세포 또는 IL-17 및/또는 다른 전염증성 사이토카인의 발현이 켜져 있을 때.

연구에 따르면 T등록 세포는 감염 내성 116으로 알려진 과정을 통해 효과기 T 세포가 억제 세포가 되도록 유도할 수도 있습니다. 따라서 CAR T등록 세포가 국소 T의 지속적인 올리고클론 집단의 생성을 유도한다면 모든 치료 효과에 필요하지 않을 수 있습니다.등록 세포. 마지막으로 소개 폭스3 CAR T로등록 이종 프로모터의 제어 하에 있는 세포는 자연적인 경우에도 FOXP3 발현 및 억제 활성을 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다. 폭스3 표현식이 117,118,119 손실됩니다. 최소한 이 접근법은 항원 특이적 T가등록 세포가 억제 활성을 상실한 경우, 이소성으로 발현된 FOXP3는 생성된 효과기 T 세포의 활성을 최소화할 것입니다.

시그널링

효과기 T 세포와 T등록 세포에는 별개의 공동 자극 요구 사항이 있으므로 T를 제공하는 공동 자극 도메인이 가능합니다.등록 세포의 가장 억제 활성은 가장 강력한 효과기 T 세포 활성을 산출하는 공동 자극 도메인과 구별됩니다. 또한 CAR T등록 공동 자극 도메인의 선택이 CAR T의 트래피킹, 대사 및/또는 생존에 영향을 미칠 수 있으므로 세포는 각각의 표적 자가면역 질환에 대해 고유하게 설계되어야 할 수 있습니다.등록 세포. 그러나 증가하는 증거는 CD28 매개 공동 자극이 CAR T에 필요할 것임을 나타냅니다.등록 세포 120 . 지금까지 공개된 각 CAR에는 CD28 신호전달 도메인 98,99,100,101,121,122,123,124,125가 포함되어 있습니다.등록 세포 유지, 증식 및 기능 126,127 . CD28을 다른 공동 자극 도메인과 비교하는 포괄적인 연구는 수행되지 않았으므로 다른 공동 자극 도메인 단독 또는 CD28과의 조합이 유익할 수 있습니다. 예를 들어, 세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA4) 128, CD27(참조 129) 및 유도성 T 세포 공동 자극제(ICOS) 130의 세포내 도메인은 T의 증식과 발달등록 세포.

투약 및 지속성

CAR T 세포의 각 적용에 대해 특정한 환자에게 주입하기 위한 최적의 T 세포 용량을 이해하면 이 접근법의 안전성, 효능 및 경제적 타당성이 향상될 것입니다 131,132 . 그러나 CAR T 세포는 반감기를 확인하기 어려운 '살아있는' 약물로 기능하며, CAR T 세포 지속성에 대한 대부분의 지식은 조직이 아닌 말초 혈액에 존재하는 양을 측정하여 최적의 용량을 결정하는 데서 비롯됩니다. T 세포는 기껏해야 복잡하고 질병에 의존합니다. 확장 T를 사용한 초기 연구의 경우등록 급성 GVHD를 예방하기 위한 세포 집단, 더 많은 용량의 확장 T를 투여받은 환자등록 세포는 더 적은 용량을 투여받은 환자보다 더 많은 혜택을 받았습니다. 초기의 저용량 시험에서 환자의 43%가 저등급 GVHD로 발전한 반면, 고용량 시험에서는 9%의 환자만이 GVHD로 발전했습니다(대조군에서는 63%). 90,133 . T로등록 세포는 드문 세포 집단이므로 CAR T의 목표 용량에 도달하려면 고효율 배양 시스템이 필요할 수 있습니다.등록 세포 92,105 . For transplant applications, in which there is an abundance of antigen, a relatively small dose of CAR T등록 cells may be sufficient if the therapeutic population can be expanded in the patient.

A successful effector CAR T cell therapy is designed to kill every cancer or virus-infected cell in the patient, thereby eliminating the persistence of its target antigen. When target antigen becomes limiting, the pool of infused CAR T cells may retract to a size where it cannot then respond to a recurrence of cancer cells. By contrast, properly functioning CAR T등록 cell therapy will protect its target cells from elimination, and these cells will function as a source of antigen to maintain CAR T등록 cell persistence. Thus, successful CAR T등록 cell therapy will positively support the maintenance of engineered T cells and thus may have an advantage over effector CAR T cells in terms of generating a durable cure.

요약

Ultimately, the adaptation of CAR technology to treat autoimmune diseases and to facilitate organ transplantation has shown promise in the laboratory and in small animal models, which sets the stage for organ transplant studies in MHC-mismatched non-human primates. Yet, we must determine the optimal extracellular binding domains, intracellular signalling domains and manufacturing protocols for these CARs before investigating cell dosage, timing and route of administration in the clinic to maximize the safety, efficacy and durability of a cure. Owing to inherent differences between the biology of T등록 cells and the biology of effector T cells, as well as disease-specific requirements, much work remains to be done in developing the prime therapeutic product of CAR T등록 세포.


Immune Cells Genetically Engineered Into Potent Weapons For Battling HIV

By outfitting immune-system killer cells with a new pair of genes, scientists at the Albert Einstein College of Medicine of Yeshiva University transformed them into potent weapons that destroy cells infected with HIV, the virus that causes AIDS. Their novel strategy of genetically engineering immune cells to redirect their infection-fighting ability toward killing HIV-infected cells could lead to an entirely new approach for combating AIDS and other viral diseases.

After someone is infected with HIV, a subgroup of their immune cells known as CD8 cytotoxic T lymphocytes, or CTLs, recognize cells infected with HIV and kill them before they become HIV-producing factories. This CTL activity initially keeps the infection in check.

But then -- largely because these CTLs may not bind tightly enough to the infected cells or because HIV mutates so rapidly -- the virus typically evades and ultimately overpowers the immune system, leading to an increase in viral load that, in the absence of drug therapy, results in AIDS. However, a very small percentage of HIV-infected people known as elite controllers manage to suppress HIV infection for many years.

"Certain of the CTLs of elite controllers may be genetically equipped to bind tightly to HIV-infected cells and destroy them and thereby suppress the infection indefinitely," says Dr. Harris Goldstein, senior author of the study* and Director of the Einstein/Montefiore Center for AIDS Research. "Our idea," says Dr. Goldstein, "was first to identify the elite controllers' "super" CTLs and to isolate the genes that enable these cells to bind tightly to HIV-infected cells and kill them efficiently then we would transfer these genes into CTLs that do not recognize HIV-infected cells and convert them into potent killers of those cells."

After infecting a cell, HIV instructs it to make viral proteins. Tiny bits of these proteins, known as peptides, are displayed on the surface of the infected cell--the cell's way of signaling the immune system that it is infected. Detecting virus-infected cells so they can then be eliminated is the job of CTLs and the protein molecules, known as T-cell receptors, that jut from their surface.

If a CTL's T-cell receptor has the right amino acid sequence, it will recognize the HIV peptide on the infected cell as foreign--prompting the CTL to multiply and attack the infected cell. But all too often, this battle between activated CTLs and HIV-infected cells ends badly. Why, then, are super CTLs of elite controllers so effective in killing HIV-infected cells"

The explanation, the Einstein researchers postulated, is that these CTLs express T-cell receptors that either have a knack for recognizing viral peptides that tend not to mutate, or they bind extremely tightly to HIV-infected cells, enabling the elite controllers to keep their HIV infections under control.

A CTL's T-cell receptor, which is as unique for each CTL as a person's fingerprint, consists of two "chains," alpha and beta. To obtain the blueprint for making exceptionally potent HIV-specific T-cell receptors, the researchers isolated the genes that code for each of the two "chains" from the potent HIV-specific CTL. Then, as a way to efficiently insert both genes into "naïve" CTLs (from people not infected with HIV), they developed an efficient delivery system in which the genes were combined and packaged inside a special type of virus, called a lentivirus. The lentiviruses then inserted these genes into the chromosomes of naïve CTLs obtained from a naïve donor's blood and reprogrammed them into potent HIV-specific CTLs.

"We demonstrated that these genetically reprogrammed CTLs have very strong activity in terms of killing HIV-infected cells in both test tubes and an animal model," says Dr. Goldstein. In some of the animal studies, for example, the researchers injected mice with both HIV-infected human cells and with reprogrammed naïve CTLs into which the HIV-recognizing T-cell receptor genes had been inserted using the lentiviral delivery system. One week later, when the researchers looked for HIV-infected human cells in the animals, they found that the infected cells had virtually been eliminated.

Dr. Goldstein notes that this study was done using genes for just a single CTL T-cell receptor. "To make this strategy even more effective, we're now in the process of isolating a "cocktail" of CTL receptor genes that are specific for many different HIV peptides--an approach analogous to today's combination drug therapy for treating HIV infection," says Dr. Goldstein. "Ultimately, we'd like to remove CTLs from patients, convert them into potent HIV-specific CTLs by inserting a variety of HIV-specific CTL receptor genes, and then re-infuse these fresh, genetically reprogrammed CTLs back into patients. By reinforcing the immune system in this way, we hope to turn the tide of battle against HIV in favor of people infected with the virus."

*The findings appear in the March issue of the Journal of Virology. Besides Dr. Goldstein, other Einstein researchers involved in the study were Aviva Joseph, Jian Hua Zheng, Antonia Follenzi, Teresa DiLorenzo, Kaori Sango, Jaime Hyman, and Ken Cheng. Other researchers were Bruce Walker, Alicja Piechocka-Trocha and Christian Brander of Harvard Medical School and the Howard Hughes Medical Institute Erik Hooijberg of VU University Medical Center of Amsterdam, The Netherlands and Dario Vignali of St. Jude Children's Hospital, Memphis, Tennessee. The research was supported by the National Institutes of Health.


Human memory CD8+ T cells

We conduct innovative studies of human circulating and resident memory CD8+ T cells in health and disease.

CD8+ T cells are absolutely critical for immune control of multiple chronic viral infections, such as HIV, and also represent a major cellular target of immune checkpoint therapies that have entirely revolutionized the treatment outcome in cancer care. However, many still view CD8+ T cells solely as killer T cells eliminating HIV-infected or tumor cells based on concepts from studies of peripheral blood. Emerging data from us and others are demonstrating that most memory CD8+ T cells in human tissues are resident cells with limited recirculation capacity back to peripheral blood. These CD8+ T cells in tissues show differential transcriptional, epigenetic, and functional programming from circulating CD8+ T cells. This is important, as these data indicate that previous studies in blood have largely failed to capture how memory CD8+ T cells function and potentially control human diseases in tissues.

Our group use cutting-edge bulk- and single-cell technologies including 30-parameter flow cytometry, gene-expression, RNA-seq, ATAC-seq, TCR-seq and proteomics analysis to dissect the heterogeneity and function of memory CD8+ T cells. Our lab is located in a vibrant research environment at the Center for Infectious Medicine (CIM) in the top modern ANA Futura laboratories. Here, we function in close conjunction with other research groups at CIM, and also collaborate with clinicians and surgeons at the Karolinska University Hospital Huddinge to receive valuable samples. We also collaborate with other researchers at Karolinska Institutet and Science for Life laboratories in Sweden as well with leading researchers in our field from universities in Denmark, Germany, Great Britain, Spain, and USA.

Through these platforms, we study different aspects of human memory CD8+ T cell biology, with an overall aim to i) identify alternative functions of memory CD8+ T cells in human tissues, ii) delineate the heterogeneity of circulating and resident memory CD8+ T cells in human organ donors and iii) understand how memory CD8+ T cells maintain tumor and HIV control. These different aims are illustrated in the picture.


Engineered, Species-Matched Antibody Allowed for Long-Term CD8+ T-Cell Depletion in Mice

Persistent infection with pathogens such as human immunodeficiency virus (HIV), hepatitis B (HBV) and hepatitis C virus (HCV) affect close to half a billion people worldwide. Despite important progress in treating HIV and the possibility to cure HCV, prophylactic vaccines against HIV or HCV remain out of reach, and the available options to prevent HBV disease progression are unsatisfactory.

In the lab of Prof. Daniel Pinschewer at the University of Basel, Switzerland, researchers are studying mechanisms of effective immune defense in the context of chronic viral infection. Additionally, they work on new viral vector-based vaccine and immunotherapy delivery technology, aimed at preventing or helping to cure persistent viral diseases. As a model of persistent viral infection they study lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV), a natural mouse pathogen, which has been widely exploited by immunologists for almost a century. Over decades LCMV research has contributed to several milestone discoveries in the field such as neonatal tolerance, MHC-linkage of disease, MHC restriction of T cell antigen recognition, viral mutational escape from CD8+ T-cells, CD8+ T-cell exhaustion and most recently the ability to reinvigorate exhausted CD8+ T-cells by anti-PD-1 checkpoint blockade.

Team work to combat persistent viral infection

For several years already, a focus of research in the Pinschewer laboratory has been the contribution of antiviral antibody-producing B cells to CD8-mediated virus control. Detailed studies on the B cell biology of persistent infection were sparked by the initial observation that CD8+ T-cell control of protracted infection failed if not seconded by a potent virus-specific antibody response. This originally unintended journey into new territories of LCMV immunobiology led, amongst other findings, to a better understanding how persisting viruses suppress and evade antiviral B cell responses.

Inability to deplete CD8+ T-cells long-term

Studies on the interdependence of CD8+ T-cells and antibody responses in the control of chronic virus infection necessitate experimental models and approaches to selectively deplete CD8+ T-cells. Clearly, short-term transient depletion of CD8+ T-cells is insufficient to comprehensively address this question. However, the efficacy of the widely used anti-CD8 depletion antibodies is of fairly transient nature. In concert with observations by others, the scientists in Pinschewer’s team found that CD8+ T-cells reemerged after about two weeks, even when the depletion antibody was re-administered throughout. The obvious explanation was that the commonly used CD8 depletion antibodies are of rat origin, thus triggering in mice an anti-rat antibody response that critically shortens the depletion antibody’s bioavailability. In line with this, the same problem was not encountered with CD4 depletion antibodies, which remained effective for several weeks. The interpretation was that anti-rat antibody responses of mice were apparently dependent upon CD4+ T-helper cells, thus the very cells depleted by the anti-CD4 antibody.

A novel tool for CD8+ T-cell research in chronic infection

Recently, however, Pinschewer’s lab has been able to successfully deplete CD8+ T-cells long-term. Surfing the web, Daniel found Absolute Antibody’s recombinant anti-CD8 depletion antibody, which was engineered to have Mouse IgG2a constant domains especially to suit 생체 내 일하다. After contacting Absolute Antibody and receiving the antibody within a few days, Daniel’s team established in mouse experiments that the chimeric antibody, administered at standard doses, depleted CD8+ T-cells to below detection limits in blood for at least two months, thus for much longer periods of time than ever previously observed with the standard rat anti-CD8 antibody.

CD8+ T-cell population in mice treated with anti-CD8 antibody clone YTS 169.4 for depletion and isotype controls.
Mouse IgG2a format (Ab00166-2.0) is shown in purple and Rat IgG2b (Ab00166-8.1) is shown in blue. Unpublished data, courtesy and property of the University of Basel, Switzerland.

The resulting data show that the species-matched engineered antibody was able to deplete CD8+ T-cells in mice more completely and for longer than the traditional rat monoclonal. With companies like Absolute Antibody making recombinant engineered antibody options widely available, all researchers planning an 생체 내 antibody study should consider the impact of antibody species and isotype on their research.


지원 정보

S1 Text. Supporting information.

Table A. Summary of log rank test results from Fig D in S1 Text. Table B. Demographic and clinical characteristics of participants in the HEATHER trial included in the analyses. Table C. Correlations of PD-1, Tim-3, Lag-3, PD1/Tim-3, PD1/Lag-3 and Tim-3/Lag-3. Table D. Cox Model adjusted for Tim-3, PD-1, Lag-3, baseline CD4 and ART. Fig A. Gating strategy: proportion of the total CD8 T cell population that express PD-1, Tim-3, Lag-3 or CD38. Fig B. Expression of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on CD8 T cells in healthy controls and Primary HIV Infection. Fig C. Impact of Tim-3 and Lag-3 expression on CD38 CD8 T cells on clinical outcome. Fig D. Impact of co-expression at baseline on CD8 T cells of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on clinical outcome. Fig E. Gating strategy used for the characterisation of PD-1, Tim-3 and Lag-3 on memory subsets. Fig F. Correlation of CD39 expression with PD-1, Lag-3 and Tim-3.


The authors have no conflicts of interest.

This work was supported by the DC-THERA network, by the Cancer Immunology and Immunotherapy Research Project (EU254), by the Institute for Science and Technology (IWT, IWT-TBM 60511 project), and by the University Research Fund (OZR1801). S.D.A. is a Ph.D. student and J.L.A. a postdoctoral fellow of the Fund for Scientific Research Flanders (FWO). The authors thank Dr. Peter Searle (Cancer Research UK Institute for Cancer Studies, University of Birmingham, UK) for providing the 4-1BBL construct and Elsy Vaeremans, Xavier Debaere, Gwenny De Metter, Inge Betz, Abderahim Hbeddou, and Mattias Van den Abeele for excellent technical support. The authors acknowledge Sarah Maenhout for help with Western blot assays and Jean-Marc Lazou (Department of Cell Biology, Vrije Universiteit Brussel) for help with FACS sorting. The authors thank the staff of the Department of Radiotherapy (UZ Brussel) for irradiating cells. The authors are very grateful to the staff of the Department of Internal Medicine (UZ Brussel) and the Department of Internal Medicine II (Erasmus Medical Center, Rotterdam, The Netherlands) for the recruitment of patients and to all patients who willingly participated in this study.

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코멘트:

  1. Fraynee

    갭을 채울 수 있습니까?

  2. Behdeti

    그저 멋진 아이디어다.



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