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혐기성 배지를 너무 환원시키는 것이 가능합니까?

혐기성 배지를 너무 환원시키는 것이 가능합니까?


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나는 혐기성 미생물을 키우기 위해 고군분투하고 있다(P. gingivalis), 나는 산소가 없는 배양 조건을 유지하기 위해 모든 예방 조치를 취합니다. 조건이 너무 감소하여 절대 혐기성 미생물의 미생물 성장을 억제할 수 있는지 궁금합니다.

액체 매체를 만들기 위해 다음을 수행합니다.

  • 효모 추출물이 첨가된 TSB
  • + 환원제로서 0.5g/L L-시스테인 HCl
  • 플러스 레자주린 산화환원 지시약
  • 레자주린이 완전히 무색이 될 때까지 질소로 열 살포
  • 스톡 솔루션(물에 1mL/L 헤민, 에탄올에 200uL/L vit K1)에서 헤민(5 mg/L) 및 비타민 K1(1 mg/L)을 추가합니다.
  • 이 매체를 가스가 제거된 유리관에 필터 주입합니다(이는 혐기성 후드에서 발생).
  • 모든 재료(주사기, 바늘, 필터, 튜브)는 사용 전에 혐기성 후드에 남아 있어 잔류 산소가 남아 있지 않습니다.
  • 헤드스페이스를 80:10:10 N의 가스 혼합으로 교체2:코2:시간2

37에서 72시간이 지나도 성장이 안됨영형씨샵.

내가 찾은 다른 프로토콜은 산소 제거에 대해 훨씬 더 모호하거나 느슨합니다. 많은 사람들은 시스테인을 추가해야 하고 배지는 사용하기 전에 뚜껑을 느슨하게 한 상태에서 혐기성 후드에서 24시간 동안 배양해야 한다고 말합니다. 이것은 내가 산소를 너무 많이 제거하고 있는지도 모른다는 생각을 하게 했습니다.

어떻게 생각하나요?


중요할 수 있는 pH를 지정하지 않은 것으로 나타났습니다.

환원제를 너무 많이 넣을 수 있는지는 모르겠지만(그렇지 않을 것 같습니다), 이황화 교환 반응의 평형 상수가 일반적으로 1에 가깝기 때문에 많은 양의 과량이 필요한 경우가 많습니다(Cleland, 1963 참조).

나는 또한 다음 중 어떤 것이 귀하의 문제와 관련이 있는지 알지 못하지만(다시 말하지만, 나는 그렇지 않다고 생각합니다), 일반적으로 환원제로 티올을 사용하는 두 가지 측면에 대해 간략하게 언급하고 싶습니다.

첫째, 티올의 산화된(이황화물) 형태는 단백질 설프히드릴과 반응할 수 있습니다. β-mercaptoethanol을 예로 사용하면(Scopes, 1993, p 320) 환원제가 단백질에 (가역적으로) 결합되는 다음과 같은 일이 발생할 수 있습니다. 반응성 설프히드릴이 효소 활성 부위에 있는 경우 비활성화될 수 있습니다.

$$ce{2 HSCH2-CH2OH + O2 -> HOCH2CH2-S-S-CH2CH2OH + H2O2 ag{1}}$$

$$ce{HOCH2CH2-S-S-CH2CH2OH + HS-{단백질} <=>HSCH2-CH2OH + HOCH2CH2-S-S-{단백질} ag{2}}$$

언급된 바와 같이, 티올 교환 반응에 대한 평형 상수는 종종 1에 가깝습니다(Cleland, 1963)., $$ce{R1-SS-R2 + R3-SH <=> R1-SS-R3 + R2-SH ag{ 3}}$$ 이러한 이유로 많은 단백질 화학자들은 트리톨(디티오트레이톨, DTT 또는 Cleland 시약) 또는 에리트리톨의 디티올 유사체를 환원제로 사용하는 것을 선호합니다. 오른쪽으로 옮겨졌다(Cleland, 1963 참조).

안정성 문제도 있다.

용액 내 티올의 반감기는 아래 표에서 볼 수 있듯이 pH와 온도에 따라 크게 다릅니다. β-mercaptoethanol의 반감기는 pH 6.5와 20℃에서 100시간 이상이지만 pH 8.5와 20℃에서는 4시간에 불과하다.

위의 표는 Stevens, R, Stevens, L & Price, N.C(1983)에서 가져왔습니다. 단백질 정제에 사용되는 다양한 티올 화합물의 안정성, (현재는 존재하지 않는) Biochemical Education에 게재됨. 전체 기사는 Wiley 웹사이트에서 pdf로 무료로 제공됩니다.


가이징거 의료 연구소 미생물학 표본 수집 지침

혐기성 운송 매체(ATM): GML Client Services에서 주문합니다. 실온에서 보관하십시오. 햇빛에 노출시키지 마십시오. 만료 날짜를 준수하십시오.

  1. 표본 수집
  1. 액체 또는 화농성 표본 수집.
  1. 멸균 주사기와 바늘로 상처 깊숙한 곳에서 검체를 채취합니다. 가능하면 바늘에 찔리기 전에 피부를 소독해야 합니다. 주사기에 갇힌 공기는 주사기와 바늘을 똑바로 세워 빼내야 합니다. 주사기 끝의 공기를 알코올로 포화된 스폰지로 배출합니다. 바늘에 스폰지 또는 방패로 따로 둡니다.
  2. 패키지를 떼어내고 운송 수단을 제거합니다. 뚜껑의 고무 포트를 만지거나 오염시키지 마십시오.
  3. 고무 포트를 통해 운송 매체에 최대 5ml의 유체를 주입합니다. 5ml 이상의 액체가 얻어지면 전체 부피(최대 50ml)를 멸균 스크류 캡 표본 컵에 넣습니다.
  4. 실험실로 운송합니다.
  5. 수액은 ATM, 멸균 컵 또는 멸균 튜브에 넣습니다. 이는 일상적인 호기성 배양, 곰팡이 및 AFB 배양에도 허용됩니다.
  1. 조직이 ATM 튜브 내부에 쉽게 들어갈 수 있을 만큼 작으면 튜브의 캡을 풀고 튜브를 똑바로 잡고 한천 표면에 조직을 떨어뜨리고 튜브 캡을 교체합니다.
  2. 조직이 너무 커서 ATM에 들어갈 수 없는 경우 멸균 스크류 캡 수집 컵 안에 생리식염수를 적신 멸균 거즈 위에 놓습니다.
  3. ATM 또는 멸균 컵에 제출된 조직은 일상적인 호기성, 진균 및 AFB 배양에도 허용됩니다.

C. ESwab에 의한 수집(면봉은 혐기성 배양에 선호되는 수집 방법이 아님).

  1. 패키지를 떼어내고 면봉을 제거합니다.
  2. 면봉을 사용하여 표면 오염을 피하기 위해 무균 기술을 사용하여 표본을 얻습니다. 면봉 끝을 상처 깊숙이 확장하기 전에 상처 가장자리를 분리하거나 폐쇄된 농양에 작은 창을 만드는 것이 필요할 수 있습니다. 인접한 피부 여백을 만지지 않도록 주의하십시오.
  3. 튜브를 똑바로 잡고 튜브 캡을 제거합니다.
  4. 면봉을 튜브에 넣고 스코어 라인에서 떼어냅니다.
  5. 캡을 다시 튜브에 놓고 캡을 조입니다.
  6. 각 ESSwab 튜브에 면봉을 두 개 이상 넣지 마십시오.
  7. 튜브에서 액체 매체를 제거하지 마십시오.

모든 표본에 적절하게 라벨을 붙이고 즉시 실험실로 가져가십시오.

  1. 병원 내: 가능한 한 빨리 미생물학 연구실로 이송하십시오. 만약에
    튜브 시스템을 통해 보낼 때 ATM을 적절하게 완충하십시오.
    파손을 방지합니다.
  2. 택배를 통해: 가능한 한 빨리 운송하십시오. 표본을 방에 보관
    당일 운송이 불가능한 경우 최대 72시간 동안 온도를 유지합니다.

참조:
Koneman EW, 1988. 컬러 아틀라스 및 진단 미생물학 교과서. JD Lippincott, 필라델피아.


추상적 인

생물정화는 오염된 환경을 저렴하면서도 효과적으로 복원할 수 있는 잠재력이 있지만 오염된 환경에서 미생물의 성장과 대사를 제어하는 ​​요인에 대한 정보가 부족하여 실행이 제한되는 경우가 많습니다. 그러나 생물학적 정화에 대한 이해의 급속한 발전이 눈앞에 다가왔습니다. 연구원들은 이제 생물학적 정화에 중요한 미생물을 배양할 수 있는 능력을 갖게 되었으며 게놈 기반 실험 및 모델링 기술의 조합을 사용하여 미생물의 생리학을 평가할 수 있습니다. 또한, 새로운 환경 게놈 기술은 아직 배양되지 않은 유기체에 대한 유사한 연구의 가능성을 제공합니다. 생물학적 정화에 관여하는 미생물의 활동을 예측할 수 있는 모델을 기존의 지구화학적 및 수문학적 모델과 결합하면 생물학적 정화를 대부분 경험적 관행에서 과학으로 전환해야 합니다.


토양 과학: Winogradsky 기둥 만들기

소개
우리의 행성은 생명을 유지하는 데 필요한 모든 것을 재활용하고 재사용합니다. 그것은 생지화학적 순환이라고 불리는 놀랍고 거대한 재활용 시스템입니다. 실제로 플라스틱 병과 진흙을 사용하여 Winogradsky 기둥이라고 불리는 것을 구축하여 소규모로 모델링할 수 있습니다. 이 활동에서는 자신만의 Winogradsky 기둥을 만들고 다양한 영양소를 포함하는 것이 토양 미생물이 번성하고 실패하는 데 어떤 영향을 미치는지 조사합니다.

배경
생명체가 살고 성장하려면 우리처럼 주변에 특정 영양소가 필요합니다. 이러한 영양소의 대부분은 생물지구화학적 순환을 통해 지속적으로 이동되고 있습니다. 이 순환은 영양소 및 기타 화학물질을 지구의 생물과 무생물을 통해 운반합니다. 예를 들어, 한때 암석에 있던 철은 나중에 토양으로 들어가 식물에 흡수될 수 있고, 그런 다음 동물에게 먹힙니다. 생지화학적 순환은 닫힌 시스템입니다. 즉, 영양소가 손실되거나 생성되지 않고 지속적으로 재사용 및 재활용됩니다.

주어진 생태계에는 여러 가지 생지화학적 주기가 있을 수 있습니다. 생태계를 통해 재활용되는 몇 가지 중요한 영양소는 산소, 탄소 및 황입니다. 서로 다른 토양 미생물은 이러한 영양소와 기타 영양소를 재활용하는 데 중요한 역할을 합니다. 미생물학자 Sergei Winogradsky가 이러한 과정을 연구하기 위해 발명한 도구는 현재 Winogradsky 기둥이라고 불리는 진흙투성이의 긴 봉인 기둥이었습니다. 이들 중 하나 내에서 다양한 그라디언트가 형성됩니다. 예를 들어, 시간이 지남에 따라 하단보다 컬럼 상단에 더 많은 산소가 있습니다. 이러한 기울기는 다른 미생물이 컬럼 내에서 살 수 있는 위치에 영향을 줍니다.

재료
&bull 각 500밀리리터의 깨끗한 플라스틱 물병 4개. 가장자리가 매끄럽지 않고 측면이 매끄럽고 모양이 더 크고 더 좁은 병이 가장 잘 작동합니다.
황소 가위(&B)
황소 칼(선택 사항)
&bull 영구 마커
황소 눈금자(&B)
&bull 고무장화와 흙이 묻을 수 있는 헌 옷(선택사항)
&bull 진흙 투성이의 개울, 연못, 호수 또는 습지에 접근
황소 장갑(&B)
&bull 삽 또는 흙손
&bull 양동이 2개
&bull 신문 또는 일반 종이(파쇄)
&bull 계란
&bull 두 그릇
&bull 대형 믹싱볼 2개
&bull 계량컵
&bull 넓은 스틱, 병에 진흙을 담을 때 사용
&bull 계량 티스푼
&bull 13와트 소형 형광등(옵션)이 있는 조절식 책상 램프
&bull 따뜻한 실내 온도(화씨 72~78도)에 있는 책상이나 테이블과 같은 빈 표면. 직사광선을 받지 않아야 하지만 책상 램프를 사용하지 않는 경우 햇빛이 매우 잘 드는 창가 근처에 있어야 합니다.
&bull 플라스틱 랩
&bull 플라스틱 쓰레기 봉투 또는 식료품 봉투
&bull 4개의 고무줄
&bull 판지 상자 또는 갈색 종이 봉지
황소 손전등(&B)

준비
&bull 가능한 한 4개의 물병에서 포장지를 제거하십시오.
&bull 병의 꼭지를 조심스럽게 잘라냅니다. 이를 위해 가위와 칼을 사용해야 할 수도 있으며 성인의 도움이 필요할 수도 있습니다. 병이 상단 근처에서 안쪽으로 휘기 시작하는 바로 위에서 상단을 자릅니다. 나중에 깔때기로 사용할 컷오프 상단을 저장합니다.
&bull 영구 마커를 사용하여 병이 85% 정도 차게 되는 곳에 작은 표시를 하십시오. 예를 들어, 병의 높이가 6인치인 경우 바닥에서 약 5인치 위로 표시를 합니다. 이 수준까지 병을 진흙으로 채울 것입니다.
황소(&bull) 각 병에 진흙에 무엇을 추가할지 라벨을 붙입니다. 하나는 신문지가 추가되고 하나는 계란 노른자가 추가되며 두 개는 일반 진흙만 담게 됩니다(아무것도 추가되지 않음). 일반 병 중 하나는 어둠 속에 보관되고 나머지 세 병은 빛에 노출됩니다.
&bull Go는 진흙 투성이의 개울, 연못, 호수 또는 습지에서 진흙을 모으십시오. 물 주변에서 주의를 기울이고 항상 성인의 감독을 받으십시오. (먼저 진흙이 묻을 수 있는 고무 장화와 헌 옷을 신는 것이 좋습니다.) 장갑을 끼고 양동이에 진흙을 0.5~1갤런 정도 채우고 대부분 물 표면 바로 아래에서 퍼냅니다.
&bull 다른 양동이에 같은 위치에서 약간의 물(최대 0.5갤런)을 모으십시오.
&bull 양동이를 집으로 가져오고 필요한 경우 씻으십시오! (사용할 때까지 양동이가 너무 뜨거워지지 않도록 그늘진 곳에 보관하십시오.)

절차
&bull 볼에 신문이나 일반 종이를 4분의 1 정도 잘라 얇은 스트립으로 자른 다음 스트립을 작은 직사각형으로 자릅니다. 이것들은 진흙 속 미생물의 탄소 공급원이 될 것입니다. 탄소를 추가하는 것이 Winogradsky 컬럼에서 자라는 미생물에 어떤 영향을 미칠 것이라고 생각하십니까?
&bull 두 번째 그릇에 달걀 노른자(생 또는 완숙)를 넣으십시오. 완숙이면 노른자를 으깨어 으깬다. 날달걀은 살모넬라균이 함유되어 있을 수 있으므로 만진 후에는 반드시 손을 씻어야 합니다. 노른자는 진흙 속 미생물의 유황 공급원이 될 것입니다. 황을 추가하면 Winogradsky 컬럼에서 자라는 미생물에 어떤 영향을 미칠 것이라고 생각하십니까?
&bull 장갑을 끼고 양동이에 진흙을 담으세요. 교반하면서 혼합물이 밀크 쉐이크처럼 될 때까지 모은 물을 토양에 천천히 추가하십시오. 또한 교반하는 동안 진흙에서 모든 막대기, 잎 및 바위를 골라내십시오.
&bull 큰 믹싱 볼에 머드 2컵 이상과 달걀 노른자의 약 1/3을 섞습니다. 잘린 병 뚜껑을 깔때기로 사용하여 계란 노른자가 첨가된 병에 계란 노른자와 섞인 진흙을 약 1인치 붓습니다. 단단한 표면에 병을 두드려 진흙을 채우고 넓은 막대를 사용하여 진흙을 더 많이 채우십시오. 한 번에 약 1인치의 진흙을 계속 추가하고 85%가 채워질 때까지 채우십시오. 병을 옆에 두십시오.
&bull 또 다른 큰 믹싱 볼에 양동이의 진흙 2컵(물이 가라앉은 경우 다시 혼합)과 잘게 썬 신문이나 종이 1티스푼을 섞습니다. 잘린 병뚜껑을 깔때기로 사용하여 85% 표시가 될 때까지 올바르게 레이블이 지정된 병에 진흙을 한 번에 약 1인치 정도 붓고 채웁니다. 병을 옆에 두십시오.
&bull 나머지 두 병은 일반 진흙으로 표시되어야 합니다. 2개의 병에 깔때기를 넣고 진흙 양동이에서 직접 진흙을 포장합니다(물이 가라앉은 경우 다시 혼합). 85%가 채워질 때까지.
&bull 약 30분 후에 물이 각 병의 진흙 위에 약 0.2~0.8인치 깊이 있어야 합니다. 필요에 따라 조심스럽게 물을 더 추가하거나 일부를 제거하십시오. 상단에 최소 0.2인치의 빈 공간을 두십시오.
&bull 따뜻한 실내 온도(화씨 72~78도)에 있는 책상이나 탁상과 같이 비어 있는 평평한 표면을 찾습니다. 직사광선을 받지 않아야 합니다. 책상 램프를 사용하지 않는 경우 해당 지역은 매우 햇볕이 잘 드는 창 근처에 있어야 합니다. 표면을 보호하기 위해 플라스틱 쓰레기나 식료품 가방으로 표면을 덮으십시오.
&bull 병을 엎지르지 않도록 조심하면서 표면으로 조심스럽게 이동하세요! 고무 밴드로 고정된 플라스틱 랩으로 각 병을 덮으십시오. 이제 Winogradsky 컬럼을 테스트할 준비가 되었습니다!
&bull 책상 램프를 사용하지 않는 경우 3개의 Winogradsky 기둥(빛을 받을 것)을 배열하여 많은 빛을 받지만 직사광선에 노출되어서는 안 됩니다. 램프를 사용하는 경우 세 개의 기둥이 전구에서 20인치 떨어져 있도록 정렬합니다. 램프가 켜져 있는 병의 경우 램프를 향하는 병의 측면에 작은 "L"을 쓰십시오. 빛을 마주하는 쪽에서는 어떤 일이 일어날 것 같습니까?
&bull Winogradsky 기둥을 상온에서 표면에 빛을 받지 않는 일반 진흙으로 설정합니다. 그런 다음 골판지 상자를 기둥 위에 거꾸로 놓거나 빛이 병에 닿지 않도록 갈색 종이 봉지에 넣습니다. 빛을 받지 못하는 기둥은 어떻게 될까요?
&bull 다음 6주에서 8주 동안 Winogradsky 열을 설정한 위치에 그대로 두십시오. 사용 중이라면 책상 램프를 24시간 켜두세요. (플라스틱 랩 뚜껑이 헐거워지면 고무 밴드로 다시 부착하십시오.) 일주일에 한 번 기둥을 관찰하여 색상 변화를 찾으십시오. 각 착색 영역은 동일한 유형의 미생물 그룹이어야 합니다. 기둥을 관찰할 때 조명을 끄고 기둥에 밝은 손전등을 비추면 색상을 더 잘 볼 수 있습니다. 열에 어떤 색상이 표시됩니까? 열의 어디에 표시됩니까? 열이 서로 어떻게 다른가요? 기둥에 벌레, 새우, 달팽이 또는 기타 더 큰 유기체가 있습니까? 시간이 지남에 따라 열이 어떻게 변합니까? 열에 추가된(또는 추가되지 않은) 결과와 어떤 관련이 있다고 생각하십니까?
&bull 팁: 1-2주 후에 일부 열에 약간의 녹색 색상이 나타나는 것을 볼 수 있습니다. 자세히 살펴봐야 할 수도 있습니다. 녹색이 보이지 않으면 기둥에 충분한 빛이 들어오지 않을 수 있습니다. 광원에 더 가깝게 이동해 볼 수 있습니다.
&황소 추가의: 이 활동을 다시 수행하되 이번에는 각 조건에 대해 여러 병을 테스트합니다. 예를 들어, 달걀 노른자로 3개의 Winogradsky 열을 테스트합니다. 결과를 얼마나 재현할 수 있습니까? 같은 방식으로 설정한 다른 열 사이에 많은 변화가 있습니까?
&황소 추가의: 미생물의 성장이 위치에 따라 다른지 알아보기 위해 진흙이나 토양의 여러 다른 출처를 테스트해 볼 수 있습니다. 해변 모래를 시험해 볼 수도 있습니다. 당신의 결과는 당신이 테스트하는 각 장소에 살고 있는 토양의 질과 미생물에 대해 무엇을 말해준다고 생각합니까?
&황소 추가의: 독특하고 까다로운 환경에 서식하는 미생물을 찾기 위해 몇 가지 다른 종류의 첨가제를 테스트합니다. 예를 들어, 일련의 Winogradsky 컬럼에서 증가하는 양의 소금을 테스트하여 소금 애호가(호염성체라고 함)를 테스트하거나 컬럼을 다른 온도에 배치하여 열(열 통풍구 근처) 또는 추위(냉장고)를 좋아하는 미생물을 찾을 수 있습니다. . 더 극한 조건에 사는 미생물을 선택할 수 있습니까?

관찰 및 결과
빛에 있는 기둥은 빛을 마주하는 면에 녹색으로 칠해진 영역을 만들고 어두운 기둥은 짙은 갈색을 유지했습니까? 빛 속에 있던 3개의 기둥은 서로 다소 다른 색상 패턴을 만들었습니까?

시간이 지남에 따라 Winogradsky 기둥에서 다양한 영양소의 구배가 형성되었을 것입니다. 이러한 기울기는 컬럼 내에서 서로 다른 미생물이 자라는 위치에 영향을 줍니다. 예를 들어, 시간이 지남에 따라 컬럼 상단에는 하단보다 더 많은 산소가 있으며, 이는 산소를 견딜 수 있거나 산소를 생성할 수 있는 미생물이 상단에 있음을 의미합니다. 유리 산소를 견딜 수 없는 미생물(혐기성 박테리아라고 함)은 더 내려갑니다. 유사하게, 에너지를 만들기 위해 빛이 필요한 미생물(광합성 또는 이와 유사한 과정을 통해)은 기둥에서 빛을 얻을 수 있는 곳에서 살아야 합니다.

약 1~2주 후에 기둥이 받는 빛의 양에 따라 조명을 받는 측면에서 빛을 받는 기둥에 약간의 녹색 색상이 나타납니다. 이것은 주로 빛이 필요한 남조류와 조류 때문입니다. 어두운 곳의 기둥은 짙은 갈색을 유지해야 합니다. 달걀 노른자가 있는 컬럼에서 바닥 근처에서 시간이 지남에 따라 더 진한 녹색, 자주색 및/또는 검은색 착색 영역이 나타나는 것을 보았을 수 있습니다. 이러한 착색은 특정 혐기성 ​​박테리아 그룹일 수 있습니다: 녹색 유황 박테리아, 보라색 유황 박테리아 및 황산염 환원 박테리아 , 각각. 황산염 환원 박테리아는 실제로 황을 먹고 황화수소 가스를 생성하는데, 이는 녹색 및 보라색 유황 박테리아가 먹는 것입니다. 신문이 있는 칼럼에서 중간 근처에서 갈색, 주황색, 빨간색 또는 보라색의 일부 영역을 보았을 수 있습니다. 이러한 착색은 번성하기 위해 탄소원이 필요한 보라색 비황 박테리아 그룹일 수 있습니다. 물 속에서 벌레, 달팽이, 새우 또는 기타 작은 유기체를 보았을 수 있지만 황화수소는 대부분의 유기체에 유독하기 때문에 달걀 노른자가 든 병에는 많지 않을 것입니다!

대청소
날달걀은 살모넬라 균을 옮길 수 있으므로 손과 그 밖의 모든 것을 씻어야 합니다. 또한 진흙을 만진 후에는 손을 씻으십시오. Winogradsky 기둥 작업이 완료되면 허가를 받아 진흙을 외부에 버릴 수 있습니다(예: 퇴비 퇴비 또는 진흙 투성이 지역 등).

더 살펴보기
NASA 퀘스트에서 Winogradsky 기둥 비디오 데모 구축
Winogradsky 기둥, 미생물 생활
Pennsylvania State University의 Winogradsky 기둥
Science Buddies의 토양 동물원 키우기

이 활동은 Science Buddies와 협력하여 제공했습니다.


전자 수송 사슬

포도당으로부터 대부분의 ATP는 전자 수송 사슬에서 생성됩니다. 산소를 직접 소비하는 세포 호흡의 유일한 부분이지만 일부 원핵 생물에서는 이것이 혐기성 경로입니다. 진핵생물에서 이 경로는 미토콘드리아 내부 막에서 발생합니다. 원핵생물에서는 원형질막에서 발생합니다.

전자 수송 사슬은 막을 따라 4개의 단백질과 양성자 펌프로 구성됩니다. 보조인자는 단백질 I-III 사이에서 전자를 이동시킵니다. NAD가 고갈되면 I: FADH를 건너뜁니다.2 II에서 시작됩니다. 화학 삼투 현상에서 양성자 펌프는 미토콘드리아 내부에서 외부로 수소를 가져와 "모터"를 회전시키고 인산염 그룹이 거기에 붙습니다. 운동은 ADP에서 ATP로 변화하여 호기성 포도당 이화작용에서 얻은 ATP의 90%를 생성합니다.


토론 - 바이오매스 정량화를 위한 분석적 접근

배양 중 미생물 성장을 모니터링해야 합니다. 바이오매스 정량화는 오프라인, 앳라인 및/또는 온라인 접근 방식을 사용하여 타겟팅할 수 있습니다. 현미경 계수, 전자 계수 및 FACS를 포함한 오프라인 직접 세포 계수의 사용은 대표적인 샘플 부피만이 세포 수를 결정하는 데 사용되지만 액체 배지에서 미생물을 계수할 가능성을 의미합니다. 직접 세포 계수 기술은 광산란 기술과 비교하여 탁도 요구 없이 액체 배지에서 미생물의 측정을 용이하게 합니다. 이상적인 조건에서 배지 특성은 배지 내 미생물의 정량화에 영향을 미치지 않아야 하지만 배지 구성요소는 미생물의 정량화를 방해할 수 있습니다. 소화조 또는 분뇨 샘플은 대부분 어둡고 점도가 높기 때문입니다. 어둡거나 점도를 극복하기 위해 샘플을 희석할 수 있으며, 이는 나중에 세포의 양을 설명할 때 고려해야 합니다. 희석을 적용할 수 없는 경우 기질 소비, 제품 형성 또는 바이오매스 생존력 조사를 기반으로 하는 간접 바이오매스 측정 기술을 사용할 수 있습니다. 또한 복잡한 매질 화합물 또는 고분자 물질도 적절한 정량화를 방해할 수 있습니다(Reischl et al. 2018b). 미시적 열거는 오류의 가능성이 증가하지만 전자 열거 및 FACS보다 비용 효율적입니다. 가장 개연적인 수 기법을 통한 성장의 결정은 수행하기 쉽습니다. 직접 세포 계수에 비해 몇 가지 단점이 있지만 그대로 오염을 감지할 수 없고 세포를 계수하지 않고 생존 세포의 양만 추정하고 있습니다. 콜로니 카운팅을 통해 고체 배지에 대한 성장 측정을 수행할 수 있습니다. 콜로니 카운팅은 실제 세포 번호의 해명을 허용하지 않습니다. 대신, 성장은 계수되어야 하는 콜로니로 표시됩니다. 집락을 세는 대신 습식 및 건식 중량 측정을 설명할 수 있습니다. 이 방법은 체중 증가 또는 감소에 대한 통찰력만 제공하며 세포 수의 정확한 결정은 제공하지 않습니다. 또한 OD 측정을 수행해야 합니다. OD 측정을 수행할 때 매체 흡수도 고려해야 합니다. 목적과 가용예산에 따라 다양한 적용이 가능합니다.

온라인 바이오매스 측정은 미생물 성장을 실시간으로 모니터링할 수 있는 가능성을 제공합니다. 광학 센서는 세포를 직접 감지하므로 광학 센서에서 생성된 신호는 세포 형태에 크게 의존하며 이는 잘못된 응답을 생성할 수도 있습니다. 형광 광학 센서는 미생물이 방출하는 평생 형광을 측정하는 반면, 여기에서는 살아있는 미생물만 감지할 수 있습니다(Coppella and Rao 1990 Farabegoli et al. 2003). 저주파 전기화학 임피던스 분광법(EIS)은 배양 중 생존 가능한 세포 농도를 모니터링하는 온라인 프로세스 도구로 사용할 수 있습니다. 미생물 성장은 또한 재배 과정 동안 바이오매스 증가를 추정하기 위한 모델링 전략을 사용하여 정량화될 수 있습니다. 이 전략은 모든 매개변수(예: 바이오매스, 기질 및 제품)가 단일 장치로 감지되어야 하는 것은 아니기 때문에 비용 효율적입니다. 배양 용기의 측정 장치를 위한 공간이 제한되어 있기 때문에 이 모델링 전략은 배양 과정의 모니터링을 개선할 수 있습니다. ADM1 모델은 혐기성 소화 바이오프로세스의 모델링을 위해 특별히 개발되었습니다. 이 모델링 전략은 잘 적용되었으며 추가 발전이 의도되었습니다.


유황 인돌 운동성 매체(SIM)


이것은 차등 매체입니다. 그것은 몇 가지 일을 하는 유기체의 능력을 테스트합니다: 유황 감소, 인돌 생성 및 한천을 통해 수영(운동성). SIM은 일반적으로 구성원을 구별하는 데 사용됩니다. 장내세균과.

황은 H로 환원될 수 있다.2S(황화수소)는 효소 시스테인 탈황효소에 의한 아미노산 시스테인의 이화작용 또는 혐기성 호흡에서 티오황산염의 환원에 의한 것입니다. 황화수소가 생성되면 매체에 검은 색이 형성됩니다. 프로테우스 미라빌리스 H에 대해 양성이다2에스프로덕션. 맨 왼쪽에 있는 유기체는 황화수소 생성에 양성입니다.

트립토파나아제라는 효소가 있는 박테리아는 아미노산인 트립토판을 인돌로 전환할 수 있습니다. Indole은 첨가된 Kovac’s 시약과 반응하여 붉은 색(indole +)인 rosindole 염료를 형성합니다. 대장균 인돌 양성이다. 왼쪽에서 두 번째 사진의 유기체는 E. coli이며 인돌 양성입니다.

SIM 튜브는 튜브 바닥에 단일 찌르기로 접종됩니다. 유기체가 운동성인 경우 성장은 찌른 자국에서 방출되어 전체 튜브가 탁하게 보입니다. 녹농균 그리고 의 긴장 프로테우스 미라빌리스 우리가 함께 일하는 것은 움직일 수 있습니다.


테스토스테론 — 테스토스테론이 하는 일과 하지 않는 일

테스토스테론 하면 무엇이 떠오르나요? 마초맨? 공격적이고 참을성이 없는 A형 행동? 도로 분노? 폭행?

나쁜 행동에서 테스토스테론의 역할은 대체로 신화입니다. 게다가, 테스토스테론은 당신을 놀라게 할 수 있는 건강과 질병에서 다른 중요한 역할을 합니다. 예를 들어, 테스토스테론이 전립선암의 핵심 인자라는 것을 알고 계셨습니까? 아니면 여성에게도 테스토스테론이 필요합니까? 테스토스테론에는 나쁜 행동을 하는 사람들보다 더 많은 것이 있습니다.

테스토스테론의 역할

테스토스테론은 남성의 주요 성 호르몬이며 다음과 같은 여러 가지 중요한 역할을 합니다.

  • 음경과 고환의 발달
  • 사춘기 동안 목소리가 깊어짐
  • 사춘기에 시작되는 수염과 음모의 출현은 대머리의 역할을 할 수 있습니다.
  • 근육의 크기와 강도
  • 뼈 성장과 힘
  • 성욕(리비도)
  • 정자 생산

테스토스테론이 너무 적은 청소년기는 정상적인 남성화를 경험하지 못할 수 있습니다. 예를 들어, 성기가 커지지 않을 수 있고, 얼굴 및 체모가 부족할 수 있으며 목소리가 정상적으로 깊어지지 않을 수 있습니다.

테스토스테론은 또한 정상적인 기분을 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다. 아직 발견되지 않은 이 호르몬의 다른 중요한 기능이 있을 수 있습니다.

뇌에서 뇌 기저에 있는 뇌하수체로 보내는 신호는 남성의 테스토스테론 생산을 제어합니다. 그런 다음 뇌하수체는 신호를 고환에 전달하여 테스토스테론을 생성합니다. "피드백 루프"는 혈액 내 호르몬의 양을 밀접하게 조절합니다. 테스토스테론 수치가 너무 높아지면 뇌는 뇌하수체에 신호를 보내 생산을 줄입니다.

테스토스테론이 남성에게만 중요하다고 생각했다면 오산입니다. 테스토스테론은 난소와 부신에서 생성됩니다. 그것은 여성의 여러 안드로겐(남성 성 호르몬) 중 하나입니다. 이 호르몬은 다음에 중요한 영향을 미치는 것으로 생각됩니다.

  • 난소 기능
  • 뼈 강도
  • 정상적인 리비도를 포함한 성행위(증거는 확실하지 않음)

테스토스테론(다른 안드로겐과 함께)과 에스트로겐 간의 적절한 균형은 난소가 정상적으로 작동하는 데 중요합니다. 세부 사항은 불확실하지만 안드로겐은 정상적인 뇌 기능(기분, 성욕 및 인지 기능 포함)에서도 중요한 역할을 할 수 있습니다.

알고 계셨나요?

테스토스테론은 콜레스테롤로부터 체내에서 합성됩니다. 그러나 콜레스테롤 수치가 높다고 해서 테스토스테론 수치가 높아지는 것은 아닙니다. 테스토스테론 수치는 뇌하수체에 의해 너무 조심스럽게 조절되어 발생합니다.

너무 많은 테스토스테론의 위험성

자연적으로 발생하는 테스토스테론이 너무 많다는 것은 남성에게 흔한 문제가 아닙니다. 사람들이 테스토스테론 과잉의 명백한 증거라고 생각할 수 있는 것, 즉 노상 분노, 리틀 리그 게임에서 아버지들 사이의 싸움, 성적 난잡을 고려할 때 놀랄 수 있습니다.

이것의 일부는 "정상적인" 테스토스테론 수치와 "정상적인" 행동을 정의하는 데 어려움이 있기 때문일 수 있습니다. 테스토스테론의 혈중 농도는 시간이 지남에 따라, 심지어 하루 동안에도 극적으로 변합니다. 또한 테스토스테론 과잉의 증상(아래 참조)처럼 보일 수 있는 것이 실제로는 이 호르몬과 관련이 없을 수 있습니다.

사실, 남성의 비정상적으로 높은 테스토스테론 수치에 대해 우리가 알고 있는 대부분은 근육량과 운동 능력을 증가시키기 위해 단백 동화 스테로이드, 테스토스테론 또는 관련 호르몬을 사용하는 운동 선수에게서 나옵니다.

남성의 비정상적으로 높은 테스토스테론 수치와 관련된 문제는 다음과 같습니다.

  • 낮은 정자 수, 고환의 수축 및 발기 부전(이상해 보이지 않습니까?)
  • 심장 근육 손상 및 심장 마비 위험 증가
  • 배뇨 곤란을 동반한 전립선 비대증
  • 간 질환
  • 좌창
  • 다리와 발의 붓기와 체액 저류
  • 체중 증가, 아마도 부분적으로 식욕 증가와 관련이 있을 수 있음
  • 고혈압과 콜레스테롤
  • 불명 증
  • 두통
  • 근육량 증가
  • 혈전 위험 증가
  • 청소년의 발육부진
  • 비특이하게 공격적인 행동(잘 연구되지 않았거나 명확하게 입증되지는 않았지만)
  • 기분 변화, 행복감, 과민성, 판단력 장애, 망상

여성에서 테스토스테론 수치가 높은 가장 흔한 원인은 다낭성 난소 증후군(PCOS)입니다. 이 질병은 흔합니다. 폐경 전 여성의 6~10%에서 발생합니다.

PCOS가 있는 여성의 난소에는 여러 개의 낭종이 있습니다. 증상으로는 불규칙한 월경, 생식력 감소, 얼굴, 사지, 몸통 및 음모 부위의 과도하거나 거친 털, 남성형 대머리, 검게 변한 피부, 두꺼운 피부, 체중 증가, 우울증 및 불안 등이 있습니다. 이러한 많은 문제에 사용할 수 있는 한 가지 치료법은 남성 성 호르몬의 작용을 차단하는 이뇨제(물약)인 스피로노락톤입니다.

질병이나 약물 사용으로 인해 테스토스테론 수치가 높은 여성은 남성이 가질 수 있는 많은 문제 외에도 유방 크기가 감소하고 목소리가 깊어질 수 있습니다.

너무 적은 테스토스테론

최근 몇 년 동안 연구자(및 제약 회사)는 특히 남성에서 테스토스테론 결핍의 영향에 초점을 맞추었습니다. 사실, 남성은 나이가 들어감에 따라 테스토스테론 수치가 매년 약 1%에서 2%로 매우 점진적으로 떨어집니다. 이는 폐경기를 유발하는 에스트로겐의 상대적으로 빠른 감소와 달리. 고환은 테스토스테론을 덜 생산하고, 뇌하수체에서 고환에게 테스토스테론을 생성하도록 지시하는 신호가 적으며, 단백질(성호르몬 결합 글로불린(SHBG)이라고 함)은 나이가 들어감에 따라 증가합니다. 45세 이상의 남성 중 3분의 1 이상이 정상으로 간주될 수 있는 것보다 테스토스테론 수치가 감소했을 수 있습니다(언급한 바와 같이 최적의 테스토스테론 수치를 정의하는 것은 까다롭고 다소 논란의 여지가 있음).

성인 남성의 테스토스테론 결핍 증상은 다음과 같습니다.

  • 몸과 수염 감소
  • 근육량 감소
  • 낮은 성욕, 발기 부전, 작은 고환, 정자 수 감소 및 불임
  • 유방 크기 증가
  • 안면홍조
  • 과민성, 집중력 저하 및 우울증
  • 체모의 손실
  • 부러지기 쉬운 뼈와 골절 위험 증가

테스토스테론 결핍증이 있는 일부 남성은 테스토스테론 대체제를 복용하면 개선될 낮은 테스토스테론과 관련된 증상이나 상태가 있습니다. 예를 들어, 골다공증과 테스토스테론 수치가 낮은 남성은 테스토스테론 대체 요법으로 뼈의 강도를 높이고 골절 위험을 줄일 수 있습니다.

놀라운 사실이지만 여성은 테스토스테론 결핍 증상으로 인해 괴로워할 수도 있습니다. 예를 들어, 뇌하수체 질환은 부신 질환으로 인한 테스토스테론 생산 감소로 이어질 수 있습니다. 그들은 낮은 성욕, 뼈의 강도 감소, 집중력 저하 또는 우울증을 경험할 수 있습니다.

알고 계셨나요?

낮은 테스토스테론이 그렇게 나쁜 것이 아닌 경우가 있습니다. 가장 흔한 예는 아마도 전립선암일 것입니다. 테스토스테론은 전립선과 전립선암이 자라도록 자극할 수 있습니다. That's why medications that lower testosterone levels (for example, leuprolide) and castration are common treatments for men with prostate cancer. Men taking testosterone replacement must be carefully monitored for prostate cancer. Although testosterone may make prostate cancer grow, it is not clear that testosterone treatment actually causes cancer.

Diseases and Conditions That Affect Testosterone

Men can experience a drop in testosterone due to conditions or diseases affecting the:

  • Testes – direct injury, castration, infection, radiation treatment, chemotherapy, tumors
  • Pituitary and hypothalamus glands – tumors, medications (especially steroids, morphine or related drugs and major tranquilizers, such as haloperidol), HIV/AIDS, certain infections and autoimmune conditions

Genetic diseases, such as Klinefelter syndrome (in which a man has an extra x-chromosome) and hemochromatosis (in which an abnormal gene causes excessive iron to accumulate throughout the body, including the pituitary gland) can also affect testosterone.

Women may have a testosterone deficiency due to diseases of the pituitary, hypothalamus or adrenal glands, in addition to removal of the ovaries. Estrogen therapy increases sex hormone binding globulin and, like aging men, this reduces the amount of free, active testosterone in the body.

Testosterone Therapy

Currently, testosterone therapy is approved primarily for the treatment of delayed male puberty, low production of testosterone (whether due to failure of the testes, pituitary or hypothalamus function) and certain inoperable female breast cancers.

However, it is quite possible that testosterone treatment can improve symptoms in men with significantly low levels of active (free) testosterone, such as:

  • 일반화된 약점
  • 에너지 부족
  • Disabling frailty
  • 우울증
  • Problems with sexual function
  • Problems with cognition.

However, many men with normal testosterone levels have similar symptoms so a direct connection between testosterone levels and symptoms is not always clear. As a result, there is some controversy about which men should be treated with supplemental testosterone.

Testosterone therapy may make sense for women who have low testosterone levels 그리고 symptoms that might be due to testosterone deficiency. (It's not clear if low levels 없이 symptoms are meaningful treatment risks may outweigh benefits.) However, the wisdom and effectiveness of testosterone treatment to improve sexual function or cognitive function among postmenopausal women is unclear.

People with normal testosterone levels are sometimes treated with testosterone at the recommendation of their doctors or they obtain the medication on their own. Some have recommended it as a "remedy" for aging. For example, a study from Harvard Medical School in 2003 found that even among men who started out with normal testosterone results noted loss of fat, increased muscle mass, better mood, and less anxiety when receiving testosterone therapy. Similar observations have been noted among women. However, the risks and side effects of taking testosterone when the body is already making enough still discourages widespread use.

결론

Testosterone is so much more than its reputation would suggest. Men and women need the proper amount of testosterone to develop and function normally. However, the optimal amount of testosterone is far from clear.

Checking testosterone levels is as easy as having a blood test. The difficult part is interpreting the result. Levels vary over the course of the day. A single low level may be meaningless in the absence of symptoms, especially if it was normal at another time. We need more research to know when to measure testosterone, how best to respond to the results and when it's worthwhile to accept the risks of treatment.

Image: Zerbor/Dreamstime


UV-Hydrogen Peroxide Processes

2.6.4 Dyes

Azo dyes are hard to be biodegraded in conventional biological wastewater treatment processes. A successful approach to treat these contaminants in water is their mineralization by AOPs, mainly UV/H 2영형2.

Chang et al. (2010) proposed a kinetic model for dye decomposition, which consisted of varying peroxide concentration, dye concentration, pH and UV irradiation power. They considered pseudo-steady state for hydroxyl and hydroperoxyl free radicals and calculated reaction rates in different pathways thus validating the model with coefficients found in literature, and using nonlinear regression. The main conclusion of this evaluation was that with increasing H2영형2 concentration or dye concentration, the reaction rate could be increased, but it can also accelerate the consumption of hydroxyl radicals and hinder the process, if the concentrations are too high.


참고문헌

  1. Bailey & Scott’s Diagnostic Microbiology 13th Edition: Citrate Utilization
  2. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition: Citrate Utilization Test (Simmons)
  3. Microbe Online
  4. Hardy Diagnostics
  5. Your Article Library
  6. Austin Community College
  7. University of Windsor

1 thought on &ldquoCitrate Utilization Test- Principle, Media, Procedure and Result&rdquo

Hi, may I know what might be the possible reason that e coli caused the blue color of the citrate test ?



코멘트:

  1. Abdul-Ghaffar

    내 생각에 당신은 옳지 않습니다. 나는 입장을 방어 할 수있다. 오후에 저에게 편지를 보내십시오. 우리는 이야기 할 것입니다.

  2. Voodoolar

    나쁘지 않다!!!

  3. Siman

    틀림없이. 나는 위에 말한 모든 것에 동의합니다. 우리는 이 주제에 대해 소통할 수 있습니다. 여기 또는 오후에.

  4. Zulut

    제 생각에는 이것이 최선의 선택이 아닙니다.

  5. Idrissa

    모든 것을 시도 할 필요가 없습니다

  6. Pell

    매우 깊고 긍정적인 기사, 감사합니다. 이제 나는 당신의 블로그를 더 자주 볼 것입니다.



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